Определение перестроек гена BCL2 (18q21) (FISH, парафиновый блок) в Клину

Зачем сдавать этот анализ?

Показания к назначению анализа:

• подозрение на фолликулярную лимфому;
• дифференциальная диагностика лимфопролиферативных заболеваний (патологий, которые сопровождаются неконтролируемым делением аномальных лимфоцитов);
• выбор тактики лечения при подтвержденном диагнозе «фолликулярная лимфома».

Подробное описание исследования

Фолликулярная лимфома

Лимфома — злокачественная опухоль, которая развивается из клеток иммунной системы (лимфоцитов) и постепенно распространяется по всему организму.

Лимфомы подразделяются на две группы:

• лимфогранулематоз (болезнь Ходжкина, или ходжкинские лимфомы);
• неходжкинские лимфомы (лимфосаркомы, НХЛ).

Самая частая среди неходжкинских лимфом — фолликулярная лимфома, или лимфома клеток фолликулярного центра. Она развивается из B-лимфоцитов — клеток, которые играют важную роль в формировании антительного иммунитета.

Фолликулярная лимфома составляет 35% от всех неходжкинских лимфом и в среднем 20% от всех лимфопролиферативных заболеваний.

Симптомы фолликулярной лимфомы

Фолликулярную лимфому трудно диагностировать, так как у большинства пациентов заболевание развивается медленно и на первых этапах может никак не проявляться. Кроме того, симптомы фолликулярной лимфомы сходны с симптомами многих других заболеваний.

Первые симптомы фолликулярной лимфомы напоминают симптомы ОРВИ или ОРЗ:

• слабость;
• повышение температуры до 38 °С и выше;
• потливость, особенно в ночное время.

Затем в течение нескольких недель снижается вес, увеличиваются лимфатические узлы.

Также фолликулярную лимфому легко спутать с выраженной фолликулярной гиперплазией — доброкачественным состоянием, при котором увеличиваются лимфатические узлы.

Причины возникновения фолликулярной лимфомы

Фолликулярная лимфома возникает из-за мутаций в генах — определённых участках молекулы ДНК. ДНК — это длинная двойная цепочка органических соединений. Она хранится в ядре каждой клетки в виде плотно скрученных структур — хромосом. В ядре каждой человеческой клетки 46 хромосом.

У 90% пациентов опухоль возникает из-за переноса гена BCL-2 с 18-й хромосомы на 14-ю. Такой перенос генов называют транслокацией и записывают с помощью специальных обозначений — t(14:18).

Ген BCL-2 кодирует семейство белков, которые регулируют клеточную гибель (апоптоз). Если происходит транслокация этого гена, начинает синтезироваться повышенное количество белков BCL-2, которые подавляют процесс апоптоза. Баланс между ростом и гибелью клеток нарушается. Клетки с транслокацией t(14:18) перестают гибнуть, их становится больше, у них появляются дополнительные мутации. В результате они перерождаются в раковые.

Факторы риска развития лимфомы:

• возраст пациентов (чаще встречается в возрасте 60 лет и старше);
• иммунодефицитные состояния;
• некоторые вирусные инфекции (вирус Эпштейна — Барр, Т-лимфотропный вирус человека I типа, вирус герпеса человека VIII типа);
• генетическая предрасположенность;
• этническая принадлежность (заболеваемость выше у евреев; в США заболевание встречается у представителей европеоидной расы чаще, чем у афроамериканцев; реже всего фолликулярная лимфома наблюдается у китайцев и японцев);
• употребление табака.

Поскольку у заболевания нет яркой симптоматики, пациенты, как правило, поздно обращаются к врачу и в 80% случаев диагноз ставят тогда, когда процесс уже распространился по всему организму. У 40% пациентов поражение затрагивает костный мозг.

Чтобы выявить фолликулярную лимфому, используется метод флюоресцентной гибридизации in situ (FISH).

Источники

1. Фолликулярная лимфома у взрослых : клинические рекомендации. 2016.
2. Мекешкина Е. А. Дифференциальная диагностика фолликулярной гиперплазии лимфатического узла и фолликулярной лимфомы / Е. А. Мекешкина, С. А. Суханов, Е. А. Ложкин, Н. А. Кирьянов // Здоровье, демография, экология финно-угорских народов, 2018. №1. С. 44–46.
3. Селезнев А. А. Лимфома из клеток фолликулярного центра: современное состояние и перспективы морфологической диагностики // Вестник неотложной и восстановительной медицины, 2007. №4. С. 628–631.
4. Фолликулярная лимфома : клинические рекомендации. 2020.
5. Меджитов Р. М. Bcl-2 — белок внутренней мембраны митохондрий, блокирующий запрограммированную смерть клеток // Биохимия, 1991. Т. 56. В. 10. С. 1916–1917.
6. Sengupta P., Chattopadhyay S., Chatterjee. S. G-Quadruplex surveillance in BCL-2 gene: a promising therapeutic intervention in cancer treatment // Drug discovery today, 2017. Vol. 22 (8). P. 1165–1186. doi:10.1016/j.drudis.2017.05.001
7. Patty D. N. J., Safitri N. A., Henny Saraswati H. Specific Primer for Human Bcl-2-Protein Expression Analysis // The 2019 International Conference on Biotechnology and Life Sciences, KnE Life Sciences, 2020. P. 46–52. doi:10.18502/kls.v5i2.6438
8. Roufayel R. Regulation of stressed-induced cell death by the Bcl-2 family of apoptotic proteins // Molecular Membrane Biology, 2016. Vol. 33(6–8). P. 89–99. doi:10.1080/09687688.2017.1400600
9. Shuangge Ma. Risk Factors of Follicular Lymphoma // Expert Opinion on Medical Diagnostics, 2012. Vol. 6. Issue 4. P. 323–333. doi:10.1517/17530059.2012.686996
10. Фолликулярная лимфома // Справочник лекарственных средств Vidal
11. Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH) / Компания UNIM 
12. Использование метода флуоресцентной гибридизации in situ (FISH) для обнаружения генетических изменений у мужчин с нарушением сперматогенеза / Компания «Медико-диагностическая лаборатория»
13. Follicular Lymphoma / NORD

Особенности и преимущества методики

FISH (флюоресцентная гибридизация in situ, то есть в исходном месте) — метод анализа генетического материала клетки, при котором используются ДНК-зонды — искусственно созданные фрагменты ДНК, содержащие флюоресцентные метки.

ДНК-зонды связываются с комплементарными (взаимно соответствующими) участками ДНК исследуемых клеток. Изучение полученных образцов под флюоресцентным микроскопом позволяет выявлять различные аномалии в структуре генетического материала. Такие аномалии называют перестройками.

В анализе на фолликулярную лимфому используют ДНК-зонд, который позволяет обнаружить перестройку гена BCL2. В норме этот ген располагается на участке 18-й хромосомы, обозначаемом шифром 18q21.

Для исследования используют фрагмент ткани костного мозга, который «впаивают» в парафиновый блок. В таком виде при правильной температуре биоматериал может храниться очень долго. Блоки можно использовать для проведения повторных исследований, что очень важно при подборе тактики лечения. После исследования блок возвращают пациенту.

Что еще назначают с этим исследованием