Определение мутационного статуса генов вариабельных участков иммуноглобулинов в Курганинск

Зачем сдавать этот анализ?

Согласно действующим клиническим рекомендациям по терапии хронического лимфоцитарного лейкоза (ХЛЛ), всем пациентам с этим заболеванием на момент установления диагноза рекомендуется определить мутационный статус генов вариабельных участков иммуноглобулинов (IGHV), чтобы уточнить прогноз заболевания. Повторно проводить это исследование не нужно, так как мутационный статус IGHV при ХЛЛ никогда не меняется.

Подробное описание исследования

Хронический лимфоцитарный лимфолейкоз

B-клеточный хронический лимфоцитарный лейкоз (лимфолейкоз, или B-ХЛЛ) — это опухолевое заболевание кроветворной ткани, которое характеризуется накоплением морфологически зрелых малых B-лимфоцитов в лимфоузлах, селезёнке, печени, периферической крови и костном мозге человека.

По своему клиническому поведению ХЛЛ делят на два основных подтипа: немутированный и мутированный. Они различаются в зависимости от того, есть ли соматическая гипермутация генов, кодирующих вариабельные регионы иммуноглобулинов В-клеточного рецептора. Эту особенность и выясняют в процессе исследования на мутационный статус IGHV.

Немутированный ХЛЛ

Немутированный ХЛЛ характеризуется тем, что В-клетки с отсутствием соматической гипермутации, гены IGHV которых сходны с герминальными генами на 98–100%, не подвергались дифференцировке в герминативном центре лимфоузла. Такие клетки называют наивными В-лимфоцитами.

Немутированные варианты ХЛЛ развиваются быстрее, всегда требуют лечения, хуже отвечают на иммунохимиотерапию (ИХТ). При таком варианте ХЛЛ чаще возникают негативные хромосомные нарушения и мутации в генах, а также разные аутоиммунные осложнения. Люди с таким подтипом ХЛЛ имеют худший прогноз и общую выживаемость по сравнению с людьми, у которых мутированный подтип.

Мутированный ХЛЛ

При мутированном ХЛЛ В-клетки с наличием соматической гипермутации подверглись дифференцировке и контакту с антигеном, они возникли на более позднем этапе развития В-лимфоцита, уже после его выхода из герминативного центра. Гены IGHV этих клеток сходны с герминальными генами менее чем на 98% (отличаются от герминального гена на несколько процентов). Такие клетки называют В-клетками памяти.

Мутированные варианты ХЛЛ обычно развиваются довольно медленно, соответственно природе клеток памяти, из которых они возникли. После стандартной иммунохимиотерапии (ИХТ) многие пациенты достигают очень длительных ремиссий. Некоторые люди с этим вариантом ХЛЛ вообще никогда не нуждаются в лечении.

ХЛЛ стереотипных антигенных рецепторов

У 30–40% людей с ХЛЛ наблюдается стереотипия B-клеточного рецептора, которая также может оказывать существенное влияние на прогноз болезни.

В процессе реаранжировки генов иммуноглобулинов принимают участие гены IGHV, IGHD и IGHJ. Объединение этих генов создаёт уникальную структуру 3-го комплементарного региона (CDR3) — важной части молекулы иммуноглобулина, определяющей аффинность к антигену. Учитывая количество функциональных генов (IGHV — 50, IGHD — около 30, IGHJ — 6), вероятность получения одинаковых CDR3 должна быть очень мала, однако у значительной части людей с ХЛЛ, проживающих в разных странах, отмечено совпадение этих CDR3, что расценивают как доказательство антигенной селекции опухолевого клона. Такие случаи ХЛЛ со стереотипными CDR3 объединены в подгруппы CLL стереотипных антигенных рецепторов (САР).

Подгруппы САР CLL#2 и CLL#8 имеют доказанную прогностическую значимость и характеризуют агрессивное течение ХЛЛ.

Подгруппа CLL#2 с экспрессией гена IGHV3-21 отличается агрессивным течением ХЛЛ независимо от мутационного статуса IGHV. В 60% случаев ген IGHV3-21 мутирован.

Подгруппа CLL#8 с экспрессией немутированного гена IGHV4-39 также отличается агрессивным течением и высоким риском трансформации ХЛЛ в более агрессивную диффузную В-крупноклеточную лимфому.

Подгруппа CLL#4 с экспрессией мутированного гена IGHV4-34, напротив, отмечается во многих исследованиях как наиболее благоприятная, с индолентным, очень медленным течением ХЛЛ.

Мутированный ген IGHV3-23 указывается во многих исследованиях как дополнительный маркер плохого прогноза ХЛЛ. Это один из наиболее часто используемых генов IGHV при ХЛЛ, в большинстве случаев он экспрессируется в мутированном варианте и не входит ни в одну подгруппу САР.

Мутированный ген IGHV3-30 отмечен во многих случаях очень индолентного течения и в нескольких редких случаях спонтанной регрессии ХЛЛ.

Мутированный ген IGHV3-72 также экспрессируется при ХЛЛ с особенно стабильным и доброкачественным клиническим течением.

Диагностическое значение исследования

Мутационный статус генов вариабельного региона тяжёлых цепей иммуноглобулинов (IGHV) — один из наиболее важных и надёжных прогностических факторов хронического лимфоцитарного лейкоза (ХЛЛ). Мутационный статус IGHV влияет на скорость развития ХЛЛ, эффективность некоторых препаратов, частоту возникновения хромосомных нарушений и мутаций, длительность ремиссии и общую выживаемость пациентов.

Людям с мутированным вариантом IGHV показана иммунохимиотерапия (ИХТ), которая обычно приводит к длительным ремиссиям.

Людям с немутированным вариантом IGHV рекомендуется назначение таргетных препаратов.

Особенности и преимущества методики

Исследование мутационного статуса IGHV проводится в несколько этапов:

1. На первом этапе выделяют нуклеиновую кислоту (ДНК или РНК).
2. Затем производят амплификацию генов IGHV при помощи многоступенчатых процедур полимеразной цепной реакции (ПЦР) со специальными праймерами.
3. На следующем этапе секвенируют гены IGHV методом Сэнгера, после чего анализируют результаты.
4. На заключительном этапе полученная нуклеотидная последовательность сравнивается с известной герминальной последовательностью, определяется процент их гомологии (сходства).

Источники

1. Хронический лимфоцитарный лейкоз / лимфома из малых лимфоцитов : клинические рекомендации / Минздрав РФ. 2020.
2. Стадник Е. А., Румянцев А. М. Роль мутационного статуса VH-генов в патогенезе и подходах к терапии хронического лимфолейкоза. М., 2020.
3. Бидерман Б. В., Судариков А. Б. Гены иммуноглобулинов и стереотипные антигенные рецепторы при хроническом лимфолейкозе и других лимфопролиферативных заболеваниях // Гематология и трансфузиология. 2023. № 68(1). С. 70–79.
4. Agathangelidis A., Chatzidimitriou A., Chatzikonstantinou T., et al. Immunoglobulin gene sequence analysis in chronic lymphocytic leukemia: the 2022 update of the recommendations by ERIC, the European Research Initiative on CLL // Leukemia. 2022. Vol. 36(8). P. 1961–1968. doi:10.1038/s41375-022-01604-2
5. International CLL-IPI working group. An international prognostic index for patients with chronic lymphocytic leukemia (CLL-IPI): a meta-analysis of individual patient data // Lancet Oncol. 2016. Vol. 17(6). P. 779–790. doi:10.1016/S1470-2045(16)30029-8
6. Rossi D., Terzi-di-Bergamo L., Paoli L. de, et al. Molecular prediction of durable remission after first-line fludarabine-cyclophosphamide-rituximab in chronic lymphocytic leukemia // Blood. 2015. Vol. 126(16). P. 1921–1924. doi:10.1182/blood-2015-05-647925
7. Hamblin T. J., Davis Z., Gardiner A., et al. Unmutated Ig V(H) genes are associated with a more aggressive form of chronic lymphocytic leukemia. Blood. 1999. Vol. 94(06). P. 1848–1854.

Что еще назначают с этим исследованием